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Botrytis cinerea Pers., agente causal de la pudrición gris, infecta a más de 200 especies vegetales. Tradicionalmente, este patógeno ha sido controlado con fungicidas; sin embargo, la creciente demanda de alimentos libres de pesticidas hace necesario el uso de nuevas estrategias de control. El objetivo de este estudio fue aislar y seleccionar levaduras epífitas de vid (Vitis vinifera L.) para el biocontrol de B. cinerea en uva de mesa. Del total de levaduras aisladas (n = 256), 32 presentaron inhibición del crecimiento micelial, en cultivos duales, con un halo > 4 mm y ocho de estos aislamientos inhibieron la germinación de conidias > 90%. Al evaluar concentraciones crecientes de levaduras sobre la inhibición de la germinación de conidias, se observó una respuesta dosis-dependiente, con valores de CE₉₀ de 0,45 × 10⁵ a 0,22 × 10⁸ células mL^-1. Al evaluar la actividad antagonista de seis levaduras frente a B. cinerea en bayas de uva de mesa ‘Flame Seedless’ se determinó que al aumentar el tiempo de colonización de las levaduras en las bayas de 1 a 24 h, la actividad de biocontrol sobre B. cinerea fue superior. Estos resultados demuestran la efectividad de levaduras epífitas de vid como agentes de biocontrol de B. cinerea en uva de mesa.